注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細胞報價Anti-EOMES Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學 神經(jīng)生物學 干細胞 表觀遺傳學  

小鼠皮下脂肪細胞價格Anti-EPG5 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 50kDa

?CCRF-CEM（人急性淋巴白血病細胞）現(xiàn)貨供應Anti-EPGN Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶  

RF/6A（猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞）價格Anti-EPB41L2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學  

SK-N-SH（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）報價Anti-EPHB4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

A2（人腺樣囊性癌細胞）價格Anti-EPHA6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

LS 180（人結(jié)腸腺癌細胞）價格Anti-EPHB2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

2,4-二苯磺酰  1-辛烯-3-醇  4-溴-2-苯胺

間二  糠(基)硫醇  4-溴鄰二

5-溴-3--7-氮雜吲哚  反,順-2,6-壬二烯-1-醇  2-溴聯(lián)苯

2-溴-4-苯基乙酰苯  乙基芳樟醇  2-溴-5-甲氧基

NA  硼酸鹽助熔劑(67:33 )

Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylami)-phosphonium hexafluorophosphate  卡特縮合劑  56602-33-6

6201 Pink diatomite  6201擔體

Congo red paper  剛果紅試紙

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒 ，英文名： FAS ELISA Kit

人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA檢測試劑盒humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCAELISAKit 96T/48T

大鼠表皮生長因子受體(EGFR)免疫試劑盒 Rat epidermal growth factor receptor,EGFR ELISA kit

CLIAKitfoIMP-2(Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase2)ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2規(guī)格：48T/96T

全組織茜素紅(ALIZARIEDS)鈣染色試劑盒10次

ELISAKitABAb人抗腦組織抗體規(guī)格：48T/96T
馬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒廠家小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit*

小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Plaet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA Kit *

小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Plaet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA Kit 進口/原裝

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse plaet factor 3, PF3 ELISA Kit*

小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit *

小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody,OLAb ELISA Kit*

小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse oxidizided glutathione,GSGS ELISA Kit進口/分裝
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。