組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
1,11b-Dihydro-11b-hydroxymaackiain藏花橙G 70%鄰氨基酚磺酸 98%

1,11b-Dihydro-11b-hydroxymedicarpin藏花橙G Biological stain3,4-二甲苯酚  98%

1-Dehydro-6-gingerdione結(jié)晶紫 Biological stain3，5-二羥苯,無(wú) 97%

1-Dehydro-10-gingerdione結(jié)晶紫 ACS, ≥90.0%苔黑酚（一物） 98%

1-Hydroxy-1-(4-hydroxy-2-methoxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)propan-2-one結(jié)晶紫 AR2-乙酰吡啶 98%

2,2-Dimethyl-8-prenylchromene 6-carboxylic acid結(jié)晶紫 分析標(biāo)準(zhǔn)品2-乙酰吡咯 99%

2-(3,4-Dihydroxyphenyl)ethal胭脂紅 AR芐硫 98%

2,3,5,4’-Tetrahydroxyl diphenylethylene-2-O-glucoside胭脂紅 97%,用于生物學(xué)染色二烯基硫 98%

2,3,8-Tri-O-methylellagic acid三氯 for HPLC, ≥99.8%（）二烯基二硫 85%

2,4,5-Trimethoxybenzaldehyde三氯 Standard for GC2-乙基-3-甲基吡 99%

2’,4’,6’-Trihydroxyacetophene硫酸銅，五 SP4-乙基愈創(chuàng)木酚 ≥98%, FCC, FG

2’,4’,6’-Trimethoxyacetophene間甲酚紫 Indicator1-己硫 96%

2,4,6-Trimethoxyphel 1-O-beta-D-glucopyraside二苯胺磺酸鈉 IND2-甲硫基-3-甲基吡 99%

2,4-Dihydroxy-6-methoxy-3-formylacetopheneN,N-二甲基對(duì)苯二胺草酸鹽 AR,98%4-甲基辛酸 98%

2’,4’-Dihydroxy-6’-methoxyacetophene二乙烯苯, 包含1000ppm 4-叔丁基鄰苯二酚穩(wěn)定劑, Standard for G基硫 99%

2,4-Dihydroxyacetophene二十二烷 standard for GC，≥99.0% (GC)2,3,5,6-四甲基吡  98%

冰乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）GABARAPL1 (D5R9Y) XP® Rabbit mAbPenicillin G  青霉素G抗體

36%乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-Chk2 (Ser33/35) AntibodyPEN2   早老素γ分泌酶2抗體

冰乙酸（HPLC,≥99.9%）Phospho-Chk2 (Ser33/35) AntibodyPELO  PELO蛋白抗體

Amberlite® IRP-69陽(yáng)離子交換樹(shù)脂Phospho-Chk2 (Ser19) AntibodyPEG3  PEG3蛋白抗體

苊烯（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-Chk2 (Ser19) AntibodyPEG10  肝癌高表達(dá)基因抗體

二乙烯基苯與乙烯基苯磺酸鈉的聚合物Phospho-Chk2 (Ser516) AntibodyPEF1  調(diào)亡誘導(dǎo)因子家族蛋白PEF1抗體

二苯胍（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-Chk2 (Ser516) AntibodyPEDF/SERPINF1  色素上皮源性因子抗體

13-乙?；?9-羥基巴卡丁III（標(biāo)準(zhǔn)品）AS160 (C69A7) Rabbit mAbPectinesterase  果膠酶抗體

(+)-冰片（標(biāo)準(zhǔn)品）SimpleChIP® Human MEF2A Exon 1 PrimersPectinesterase  果膠酶抗體

乙酸龍腦酯（標(biāo)準(zhǔn)品）HERPUD1 AntibodyPEA3  瘤促活化因子3抗體
福賽斯坦納菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格O-Methylbroussochalcone B (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　20MG

Esculentoside H (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　20MG

Swertiajaponin (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　20MG

Ajugasterone C (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　10MG

Hirsuteine (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　5MG

Wilfortrine (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　10MG

Timosaponin A1 (HPLC,≥94%)標(biāo)準(zhǔn)品　10MG

Hydroxy Sprengerinin C, 17 (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　10MG

Precyasterone (HPLC,≥96%)標(biāo)準(zhǔn)品　5MG

Raddeaside 20 (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　5MG

Pseudoginseside RT1 (HPLC,≥98%)標(biāo)準(zhǔn)品　20MG

Orientin 2''-O-p-trans-coumarate,HPLC...標(biāo)準(zhǔn)品　10MG

Bis(4-nitrophenyl)phosphoric Acid,>98.0%通用試劑　1G

Gallocyanine,90%通用試劑　1G

Quiline yellow,95%通用試劑　1G