?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
2-Ami-1-phenylethalN-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯胺鈉鹽 99%2,3-二甲氧基苯甲酸 99%

cis-4-Hydroxy-D-prolineN-乙基-N-（3-磺基）苯胺鈉鹽 99%對(duì)羥基苯甲酸酯鈉 USP,Ph Eur

DON2-乙基己氧基胺 99%3,4,5-*氧苯 98%

L-(+)-Selemethionine固藍(lán)B 90%1,2,4-苯三酸酐 97%

AdoMet固黑K鹽 80%3-氯-2-甲基-1-烯 97%

L-Homocystine固深紅 GBC 90%1,4-二乙基苯( PDEB ) GCS, ≥99.5% (GC)

L-Cystathionine固紅 KL鹽 Biological stain,含量90%1,4-二乙基苯 99%

Cys-Gly固紅RC 生化試劑級(jí)甲基烯磺酸鈉 99%

ε-PL固紅 RL Biological stain1,4-二羥基蒽醌 96%

 α-Chymotrypsin(bovine)固紅B 90%順式-烏頭酸 90%

糊精化酶固紅TR半氯化鋅鹽 90%順式-烏頭酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

α-Amylase from Aspergillus oryzae固紅-萘磺酸 TR 95% ≥97% (HPLC)

β-Amylase固紅紫LB鹽 95% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97%

Pectinase固紫B鹽 80%次  分析標(biāo)準(zhǔn)品

Pectolyase Y-23N-2-羥乙基哌-N'-2-乙磺酸鈉鹽 99%中 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

BromelaineN-2-羥乙基哌-N'-2-乙磺酸鈉鹽  99.5%硬脂酸鈣 Ca 6.6-7.4%

溴代異烷(標(biāo)準(zhǔn)品)ERC1 (P85) AntibodyO-GlcNAc transferase  O位N-乙酰葡萄糖胺OGT抗體

乙酸芐酯(標(biāo)準(zhǔn)品)ERC1α (D1055) AntibodyOGG1/8 hydroxyguanine DNA glycosylase  8-羥基鳥嘌呤DNA糖基化酶

2-溴苯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp44 AntibodyOGFOD2  末端多聚腺苷酸2蛋白抗體

鄰苯二甲酸丁芐酯(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp57 (A484) AntibodyOGFOD1  末端多聚腺苷酸1蛋白抗體

鄰苯二甲酸丁芐酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1316) AntibodyODZ3/Teneurin 3  固生蛋白3抗體

聯(lián)苯菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)tch3 AntibodyODF3B  外致密纖維蛋白3B抗體

聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%,基體：石油)Oct-4A (C52G3) Rabbit mAbODF3/CT135  腫瘤/抗原135抗體

芐嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)M-CSF Receptor (E4T8Z) Rabbit mAbODF2/Cenexin1  尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體

草除靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Calreticulin AntibodyODC  鳥氨酸脫羧酶抗體

仲丁(標(biāo)準(zhǔn)品)VEGF Receptor 1 AntibodyOCT6  八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體
米氏旋毛蟲PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格(R)-(+)-BINAP,98%表面活性劑　1G

HCTU,≥98.0%通用試劑　5G

mo-Methyl terephthalate,97%通用試劑　5G

TBTU,≥97.0%通用試劑　5G

Methyl cinnamate,≥99.0%通用試劑　100G

2-Naphthyl acetate,98%通用試劑　5G

2-Butoxyethyl acetate,99%通用試劑　100ML

Ethylene glycol dimethacrylate,98%通用試劑　10ML

2-Methoxyethyl acetate,98%通用試劑　100ML

Dimethyl acetylenedicarboxylate,99%通用試劑　5G

Ethyl chlorooxoacetate,98%通用試劑　25G

2-Ethylhexyl nitrate,97%通用試劑　250ML

Triethyl 1,1,2-ethanetricarboxylate,99%通用試劑　5G

Isopropyl acetoacetate,≥99.0%通用試劑　25G

tert-Butyl acetoacetate,98.0%通用試劑　25G