注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Boc-D-serine派洛寧Y 超級(jí)純4-溴甲基喹啉-2-酮 97%

Nα-Boc-D-tryptophan麗春紅S 分子生物學(xué)級(jí)4-二苯基苯甲酸 98%

Boc-L-valine麗春紅S Biological stain鹽酸林可霉素 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Boc-D-valine蛋白酶K 用于分子生物學(xué)，≥30 units/mg protein鹽酸林可霉素 95%

Z-L-Alanineβ-內(nèi)酯 98%銻粉 99.5% metals basis

Z-D-alanine胃蛋白酶（豬源） 1：3000銻 CP,99.0%

Z-Gln-OH胃蛋白酶（豬源） 1：15000銻粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mm

Z-Asn-OH嘌呤霉素鹽酸鹽 99%銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,基體:6.0 mol/L HCl

CBZ-L-Phe青霉素/鏈霉素 組織培養(yǎng)級(jí)，無菌銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,，溶劑：鹽酸

Z-D-Phe-OH青霉素/鏈霉素/兩性霉素B 組織培養(yǎng)級(jí)，無菌銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：1%鹽酸

Z-Glu-OH青霉素/鏈霉素/新霉素 組織培養(yǎng)級(jí)銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L(20°C)，基體: 20%HCl

CBZ-D-Glu派洛寧B 高純級(jí)銻標(biāo)準(zhǔn)溶液1.24±0.26mg/L

Z-L-aspartic acid胃蛋白酶抑制劑  超純級(jí) 銻粒 99.99% metals basis

N-Cbz-D-aspartic Acid磷酰二肽 超純級(jí)銻粒 99.9999% metals basis

CBZ-L-Arg蛋白酶抑制劑混合物 蛋白組學(xué)級(jí)氧化鉍 SP

Z-DL-phenylalanine膦酰二肽鈉 99%氧化鉍 99.99% metals basis

圣草次苷(標(biāo)準(zhǔn)品)cdc2 (E1Z6R) Rabbit mAbp400  p400蛋白抗體

乙二乙(標(biāo)準(zhǔn)品)C/EBPalpha (p42) Antibodyp38MAPK/MAPK14/p38Alpha  絲裂原活化蛋白激酶p38α抗體

戊酸乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-C/EBPα (Thr222/226) AntibodyP38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體（P-p38 MAPK）

芴(Standard for GC,≥99%(HPLC))Phospho-C/EBPα (Thr222/226) AntibodyP311 protein  神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體

芴(標(biāo)準(zhǔn)品)4E-BP2 AntibodyP2Y4  P2Y4受體抗體

芴甲氧羰酰氯（Fmoc-Cl）4E-BP2 AntibodyP2Y2  嘌呤ATP受體抗體

氟苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)P2Y1R/P2ry1  P2Y1受體抗體/嘌呤受體抗體

氟羅里硅土(農(nóng)殘級(jí))ZO-2 AntibodyP2X2/ATP receptor  嘌呤受體P2X2抗體

合成硅酸鎂吸附劑(250-125um)ZO-2 AntibodyP2RX4  三磷酸腺苷門控陽離子通道蛋白抗體

戊菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Vav2 (C64H2) Rabbit mAbP2RX3/ATP receptor  嘌呤受體P2X3抗體
齒垢密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格Calcium pyrophosphate,≥99.9%通用試劑　10G

Calcium peroxide,75%, 100?200 mesh通用試劑　250G

Calcium hypophosphite,≥99.0%通用試劑　25G

Calcium sulfite,98%通用試劑　250G

Anhydrous gypsum,≥99.9%通用試劑　250G

Ethylenediaminetetraacetic acid calciu...通用試劑　50G

Calcium Gluconate,≥98%通用試劑　100G

Sand,99%通用試劑　50G

Calcium,99%通用試劑　5G

Calcium hydroxide通用試劑　100G

Calcium hypochlorite通用試劑　100G

Calcium phosphate mobasic,≥85%通用試劑　100G

Calcium hydrogenphosphate dihydrate,98%通用試劑　100G

Calcium phosphate,≥96.0%通用試劑　250G

Calcium iodate,98%通用試劑　25G
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。