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高首鱘虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:AACT檢測(cè)試劑盒規(guī)格:50管/48樣 測(cè)試方法:高效液相色譜法 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
產(chǎn)品分類(lèi)
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1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 高首鱘虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 |
英文名稱(chēng) | White Sturgeon Iridovirus(WSIV)PCR |
貨號(hào) | LZP7468 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Barbituric acidFmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%甲酸甲酯 95%
Parafuchsin hydrochlorideFmoc-O-磷酸基-L-酪氨酸 98%甲酸甲酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC)
Nitroso R saltFmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%甲酸甲酯 99%,光譜純
DithizoneFMOC-L-纈氨酸五氟苯酯 98.0%甲酸甲酯 99%
CurcuminFMOC-L-苯氨酸五氟苯酯 96%結(jié)晶四氯化錫 99.995% metals basis
Fast Violet B SaltN-甲酰-DL-色氨酸 98%2-甲氧基萘 98%
4-Dimethylamibenzal rhodanineN-Fmoc-N'-Boc-L-2,3-二氨基酸 97%2-氨基-1,3- 98%
DNSClFmoc-D-3-(1-萘基)氨酸 ≥98.5%絲氨鹽酸鹽 98%
1-NaphthylamineFmoc-3-(1-萘基)-L-氨酸 98%2,6-二氯-4-氨基苯酚 98%
Nuclear fast redFmoc-3-(2-萘基)-D-氨酸 98%鄰氨基苯酚 98%
Chrome Blue KFmoc-3-(2-萘基)-L-氨酸 98%3-氨基-4-羥基苯甲酸 97%
Ammonium metavanadateFMOC-D-3-(3-吡啶基)-氨酸 98%鄰氨基對(duì)叔丁基酚 98%
1,8-ANSFmoc-L-瓜氨酸 98%苯甲酰 98%
DMTDFmoc-3-L-氨基丁酸 98%2-(溴甲基)萘 98%
Oracet blue B(3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酸 96% 2,5-二苯基噁唑 99%, 閃爍級(jí)
Calconcarboxylic acidFmoc-L-β-谷氨酸-5-叔丁基酯 98%2,6-二氯-4-酚 98%
四甲基硫酸氫銨(離子色譜級(jí),≥99.0%(T))α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
三乙胺(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))Drosha (D30F3) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
四乙基溴化銨(離子對(duì)色譜級(jí))MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
四丁基化銨(離子對(duì)色譜級(jí))eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
三辛胺(離子對(duì)試劑)eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))eIF3H (D9C1) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
1-己烷磺酸鈉(離子對(duì)色譜級(jí),>98.0%(T))HIF-1β/ARNT (C15A11) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
高氯酸鈉,無(wú)(for HPLC,99.0%)Acetyl-Histone H2B (Lys20) (D7O9W) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
四甲基溴化銨(離子對(duì)色譜級(jí),≥99.0%(AT))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗牛IgG
三溴(光譜級(jí),>99.0%(GC))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG 小鼠抗牛IgG
高首鱘虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格肝細(xì)胞粘附分子抗體ent-16β,17-Dihydroxykauran-19-oic acid中文名:別名:分子式:C20H32O4
禽流感H5亞型全病毒抗體9-Hydroxy-13E-labden-15-oic acid中文名:別名:分子式:C20H34O3
17-β-羥脫氫酶6抗體Scutebata G中文名:別名:分子式:C40H419
組胺受體H2抗體Carsol中文名:鼠尾草酚別名:Picrosalvin分子式:C20H26O4
同源盒蛋白HOXA11抗體Bonducellpin C中文名:別名:分子式:C23H32O7