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黃頭病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關產品:蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體γ -GBL)(standard for GC,≥99.9%(GC))Phospho-CrkII (Tyr221) AntibodyMicrocephalin 1/BRIT1 小腦癥基因1/認知相關蛋白抗體1-己烯(Standard for GC)PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 黃頭病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Yellow Head Virus(YHV)RTPCR |
貨號 | LZP7479 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Octyltrimethylammonium chloride亮抑酶酞 ≥90% (HPLC漆黃素 98%
SB3-8L-亮氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%高良姜素 分析標準品,≥99%
SB3-10D-亮氨酸甲酯鹽酸鹽 98%藤黃酸 97% (HPLC)
Benzyltrimethylammonium bromideD-亮氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%京尼平甙 分析標準品,≥98%
3-(2-Amiethylami)propyldimethoxymethylsilaneBoc-Lys(Boc)-ONp 97%銀杏內酯B 分析標準品,≥99%(HPLC)
Polyquaternium-10Boc-Lys(Z)-OSu 98%銀杏內酯 C 分析標準品,≥99%
THAMN-(叔丁氧羰基)-D-賴氨酸 98%沒食子酸,一物 AR,98.5%
BIS-TRIS propaneN-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]-N'-[(2-烯氧基)羰基]-L-賴氨酸 95%人參皂甙 Rb2 分析標準品
TRIS-HC1N-芴甲氧羰基-N'-[1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環(huán)己基亞甲基)-3-甲人參皂甙 Rh2 分析標準品,>98%
TRIS acetate saltZ-丁氧羰基賴氨酸 98%人參皂甙 Rg1 分析標準品,>98%
Tris carbonateH-Leu-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh人參皂甙 Rg2 分析標準品,>98%
CAPSH-Lys(Boc)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh人參皂甙 Rg3 分析標準品,>98%
CAPSOFmoc-Leu-Wang resin 100-200 mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/g人參皂甙 Rc 分析標準品,>98%
CAPSO sodium saltFmoc-Lys(Boc)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB人參皂甙 Rd 分析標準品,>98%
CAPS Sodium saltL-亮氨酸-4-胺 99%人參皂甙 Re 分析標準品,>98%
PIPESL-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽 98%人參皂苷Rh1 分析標準品,≥98%
2,3-二甲基丁烷(Standard for GC,>99.5%(GC))HGK AntibodyMIDN 中腦核仁蛋白抗體
甲(Standard for GC)AQP2 AntibodyMidkine 中期因子/肝素結合生長因子抗體
甲酸(Standard for GC,>99%)Phospho-HSP90α (Thr5/7) AntibodyMID2/RNF60/Midline-2 環(huán)指蛋白60抗體
呋喃(standard for GC,≥99.5%(GC))MSK1 (C27B2) Rabbit mAbMID1/Midline-1/RNF59 環(huán)指蛋白59抗體
正庚烷(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C) Rabbit mAbMICS1 生長激素誘導跨膜蛋白抗體(源性蛋白2)
正庚(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C) Rabbit mAbMicrosporidia protien 蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體
γ -丁(GBL)(standard for GC,≥99.9%(GC))Phospho-CrkII (Tyr221) AntibodyMicrocephalin 1/BRIT1 小腦癥基因1/認知相關蛋白抗體
1-己烯(Standard for GC)PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific) (Alexa Fluor® 488 Conjugate)MICB MHC I類鏈相關蛋白B
正己烷(Standard for GC,>99.5%(GC))CrkII AntibodyMICA/MHC I MHC I類鏈相關蛋白A/組織相容性復合物1抗體
六氯乙烷(Standard for GC, ≥99.5% (GC))RIP (D94C12) XP® Rabbit mAbMIC1/C18orf8 結腸癌相關蛋白MIC1抗體
黃頭病毒PCR檢測試劑盒說明書異戊烯焦磷酸1抗體Euonymine中文名:別名:分子式:C38H4718
胰島素誘導基因1抗體1-O-Acetyl-6α-O-(2-methylbutyryl)britannilactone中文名:別名:1-Acetoxy-6α-(2-methylbutyryloxy)eriolalide分子式:C22H32O6
胰島素樣生長因子結合蛋白7抗體2α,9α,11-Trihydroxy-6-oxodrim-7-ene中文名:別名:分子式:C15H24O4
胰島素樣生長因子結合蛋白6抗體Ustusol A中文名:別名:分子式:C15H24O4
IgLON家族蛋白5抗體1-O-Acetylbritannilactone中文名:1-O-乙酰基大花旋覆花內酯別名:Inulicin分子式:C17H24O5