注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
二(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.99%(GC))Phospho-Ezh2 (Thr311) Antibody式碳酸鋅

1,二氧六環(huán)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))Oct-4 (V241) Antibody泰妙菌素

-1,2-標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/g,基體：酸酯)Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb(+)-灰黃霉素

環(huán)己(分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.7% (GC))Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb3,二氧噻吩

9,10-二甲基蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)XBP-1s (E8C2Z) Mouse mAb鋁鎳合金

3,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ATR Antibody環(huán)基酸頻哪酯

二環(huán)己(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody炔

二并噻吩(標(biāo)準(zhǔn)品)Tyrosine Hydroxylase Antibody基酸

9,10-二基蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα (F6) Mouse mAb二茂鐵甲酸

反式-1,2-二(標(biāo)準(zhǔn)品)SCD1 (C12H5) Rabbit mAb葉黃素

3,二氨(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα1 AntibodyD-2,二氨基丁酸

2,二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα1 Antibody T

2,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb沃來(lái)西脫藍(lán)B

3,二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb溴-2-氟吡啶

3,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp72 Antibody甲硫基酸

對(duì)二甲酸二甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Claspin Antibody甲氧基-氟甲

鄰二甲酸二異酯(標(biāo)準(zhǔn)品)PRSS15/LONP1 (D8W1J) Rabbit mAbBOC-D-4,4'-二基

硫(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC）)Survivin (6E4) Mouse mAb三氟酸

犬α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒NR2D/NMDAR2D  谷氨酸受體2D200 ul

犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)ELISA試劑盒N-Ras  原癌基因100 ul

犬S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)ELISA試劑盒NR1D1/REV-ERB alpha  細(xì)胞核受體Rev-Erbα100 ul

犬S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)  酸化細(xì)胞核受體Rev-Erbα100 ul

犬P選擇素(SELP)ELISA試劑盒Nrf2  核因子2相關(guān)因子2100 ul

犬P物質(zhì)受體(TACR1)ELISA試劑盒phospho-Nrf2 (Ser40)  酸化核因子2相關(guān)因子2(Ser40)100 ul

犬N-酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒NRF-1  核呼吸因子-1100 ul

犬N端前心鈉肽(NT-ProANP)ELISA試劑盒CD303/BDCA-2  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員C100 ul

犬N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒CD304/Neuropilin-1  神經(jīng)纖毛蛋白-1100 ul
鴨特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書兔粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit *

兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eS ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit urokinase plasmigen activator,uPA ELISA Kit *

兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Urokinase-type Plasmigen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit *

兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit prothrombin fragment 1+2,F1+2 ELISA Kit 進(jìn)口/原裝小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠腺病毒（ADV）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠纖維蛋白肽B（FPB）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。